慢病毒包裝

     慢病毒包裝在基因功能的研究過程中，通過使用慢病毒介導的方法能夠大大提高基因的轉導效率，達到目的基因高效表達的目的。慢病毒主要應用于shRNA、LncRNA、cDNA以及報告基因的研究。

慢病毒包裝具有以下特點：

1）適用于難轉染的細胞，如干細胞、原代細胞等，可很大程度的提高基因轉導效率。

2）慢病毒整合細胞基因組，可進行穩轉細胞株的篩選。

3）高純度的慢病毒可用于活體動物模型。

     慢病毒表達質粒包含了包裝、感染、穩定整合宿主細胞基因組所需的遺傳信息，包裝輔助質粒則提供了所有的轉錄、包裝和重組假病毒所需要的輔助蛋白。為產出高滴度的病毒顆粒，通常將表達質粒和包裝質粒共同轉染至包裝細胞中進行病毒的包裝。包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外培養液中。通過收集含病毒顆粒的上清，進行濃縮和純化可獲得高純度和高滴度的慢病毒。

慢病毒包裝實驗步驟

1、轉染前1天，將293T細胞接種于10 CM培養皿中，加入15 mL含10％FBS的DMEM培養液，置37℃，5％CO2培養至約70－80％融合時，進行細胞轉染。

2、轉染293T細胞

1）將慢病毒表達質粒和包裝質粒加入到Opti-MEM中，混勻。

2）將適量的Lipofectamine™ 2000 (invitrogen)加入到Opti-MEM中，混勻。

3）5分鐘后，將上述兩混合液混勻，室溫靜置20分種后，將混合液加入至培養皿中，前后左右晃動搖勻。置37℃，5％CO2培養箱中培養。

3、6小時后，換含10％FBS的DMEM培養液10mL。

4、轉染48小時后，收集病毒上清，500g離心10分鐘，0.45 μm濾器過濾。

5、濃縮純化后，分裝，-80℃保存。

     我們提供已測定好滴度，可以直接進行后續實驗的慢病毒液、實驗報告。質量保證，慢病毒液可用于感染目的細胞。活性滴度5×10⁸ TU/ml。

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