定量Q-PCR-ELISA檢測技術的相關原理講解
定量Q-PCR-ELISA檢測技術是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時在線監控反應過程，結合相應的軟件可以對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。可用于mRNA、microRNA、lncRNA等基因表達量的檢測。
類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：
1.模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；
2.模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，在溫度降至55℃左右時，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；
3.引物的延伸：DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性-退火-延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2-4分鐘，在一個由計算機控制的循環加熱器上經過三十個循環，就可以把原來的樣品地擴增了2的30次方倍。擴增產物的量可用下列公式表示：C＝C0(1+P)n。
其中：C為擴增產物量,C0為起始DNA量,P為擴增效率,n為循環次數。
在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環數而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續大量擴增，達到較高水平。因此，應適當調節循環次數，在平臺期前結束反應，減少非特異性產物。到達平臺期所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。
每一循環經過變性、退火和延伸，DNA含量可增加一倍（理論上）。對于某些擴增片段很短的PCR反應，即使Taq酶活性不是*也能在很短的時間內復制完成，因此可以改為兩步法，即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行，以減少一次升降溫過程，提高了反應速度。
